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本Fura-2 AM(钙离子荧光探针)是配制于无水DMSO(anhydrous DMSO)中的储存液，浓度为2mM。用于细胞内钙离子检测时，Fura-2 AM的常用浓度为0.5～5μM。通常用含有0.5～5μM的Fura-2 AM的适当溶液和细胞一起在4～37℃孵育15～60分钟，即可完成荧光探针的装载。

Fura-2是细胞内钙离子(Ca²⁺)的特异性荧光指示剂，是最常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一。Fura-2 AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fura-2 AM的荧光比较弱，最大激发波长为369nm，最大发射波长为478nm，并且其荧光不会随钙离子浓度改变而改变。Fura-2 AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fura-2，从而被滞留在细胞内。Fura-2和钙离子结合后，最大激发波长为335nm (最大激发波长随离子浓度的不同而有所不同)，最大发射波长为505nm。实际检测时推荐使用的激发波长为340nm，发射波长为510nm。如果做双波长检测，则推荐使用的激发波长为340nm和380nm。

• 本Fura-2 AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20～25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
  
• 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 用含有5%的胎牛血清的DMEM在玻璃底培养皿中培养细胞。
  
• 将培养液换成1mM的dibutylcAMP/DMEM，再培养细胞3～4天来诱导树突。
  
• 用HEPES缓冲液(20mM HEPES,115mM NaCl,5.4mM KCl,1.8mM CaCl₂,0.8mM MgCl₂,13.8mM glucose,pH7.4)来稀释本制品，制成1μM的Fura-2AM工作液。
  
• 除去培养液，加入0.5mL的Fura-2 AM工作液。
  
• 培养20分钟，然后除去Fura-2 AM工作液。
  
• 用HEPES缓冲液洗涤细胞一次，然后将细胞在HEPES缓冲液中培养1小时。
  
• 将此细胞用于荧光钙离子检测。
  
• 激发波长380nm(游离钙)和340nm(结合钙)，发射波长510nm。
  *标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。以上方法仅供参考。